《最后一间房》讲述了一位名叫若一的大学生为完成毕业作品，独自前往一家偏僻旅店寻找灵感，却意外卷入一场离奇凶杀案的故事。影片开场，若一不顾当地关于"最后一间房"的禁忌传闻，执意入住这间被尘封多年的诡异房间。当她推开斑驳的木门时，陈腐的空气夹杂着若有似无的血腥味扑面而来，墙面上隐约可见的抓痕与镜中一闪而过的鬼影，预示着这里隐藏着不为人知的秘密。 　　随着调查深入，若一发现这间客房与三年前一桩悬而未决的命案密切相关。每当夜深人静，房间里就会传来女子凄厉的哭声，浴室镜面自动浮现血字，床底暗格中藏着的染血日记残页记载着令人毛骨悚然的真相。旅店老板娘时而热情相助时而阴晴不定，而总在走廊徘徊的疯癫男人口中不断重复着"她回来了"的呓语。当若一拼凑出破碎的老照片背后隐藏的关系网时，才惊觉自己早已成为某个复仇计划中的棋子。 　　影片高潮部分，若一在密室中发现保存完好的女尸，那张与自己有七分相似的面容揭开了跨越时空的惊人联系。原来所谓的"女鬼"正是三年前在此遇害的受害者，而真凶一直在利用民俗传说掩盖罪行。当最后一间房的墙壁轰然倒塌，露出后面囚禁活人的暗室时，若一不仅要面对超自然力量的威胁，更要提防来自活人的致命杀机。在真相与幻觉交织的生死关头，她必须赶在午夜钟声响起前，解开这个由怨念编织的死亡谜题。